產(chǎn)品描述
　　Bradford 法蛋白定量是基于考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后， 產(chǎn)生藍(lán)色化合物，反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在465-595nm處有大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可通過(guò)檢測(cè)595nm的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量。
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產(chǎn)品組分

保存方法
　　冰袋運(yùn)輸，Bradford試劑A 2-8°C保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品-20°C保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
方案一、試管檢測(cè)
1、試劑準(zhǔn)備
（1）取適量5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，PBS稀釋至終濃度為2mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。配制后可立即使用，也可以-20°C長(zhǎng)期保存。
（2）稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。
表1：BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表

（3）取干凈的試管，將30μl稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。
（4）取干凈的試管，分別加入30μl待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)，并作好標(biāo)記，推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。
2、樣品孵育及檢測(cè)
（1）向上一步驟配制的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品BSA和待測(cè)樣品試管中各加入1.5ml Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，室溫放置10分鐘。
（2）用分光光度計(jì)測(cè)定595nm 處的吸光值。
3、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和計(jì)算樣品濃度
（1）利用Excel或其他軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
（2）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
方案二、微孔檢測(cè)
1、試劑準(zhǔn)備
（1）將按表2稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各5μl分別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。
表2：BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表

2、樣品孵育及檢測(cè)
（1）每孔加入250μl Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，蓋上96孔板蓋，室溫放置10 分鐘。
（2）用酶標(biāo)儀測(cè)定595nm處的吸光值。
3、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和計(jì)算樣品濃度
（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
（2）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
注意事項(xiàng)
1、樣品中若含有去垢劑會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，請(qǐng)?jiān)囉?BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒；
2、要得到更為準(zhǔn)確的蛋白濃度結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
3、需準(zhǔn)備 37°C水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計(jì)，測(cè)定波長(zhǎng)為 465-595nm 之間，595nm合適。酶標(biāo)儀需與 96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，試劑盒測(cè)定的樣品數(shù)量會(huì)因此而減少。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。